Ma?op?ytkowo?? rzekoma EDTA-zale?na (EDTA-PTCP) spowodowana obecno?ci? antykoagulantu EDTA to znane zjawisko laboratoryjne. Jest spowodowana agregacj? PLT w warunkach in-vitro i mo?e prowadzi? do niskich wynik¨®w PLT, a w konsekwencji b??dnej diagnozy i zastosowania niew?a?ciwego leczenia pacjenta.

?

W poprzednim rozdziale dotycz?cym skrzep¨®w p?ytek krwi?(ang. ?The Stories of Platelet Clump¡±)przyjrzeli?my si? dw¨®m przypadkom klinicznym, w kt¨®rych pocz?tkowo pacjenci mieli nieprawid?owe niskie wyniki PLT przy stosowaniu tradycyjnej zasady pomiaru PLT. Po ponownym przebadaniu pr¨®bek w analizatorze hematologicznym Mindray w trybie RET pomiar PLT-O da? bardziej wiarygodny wynik i ostatecznie umo?liwi? postawienie prawid?owej diagnozy.

?

Om¨®wimy teraz, w jaki spos¨®b rozwi?zanie Mindray mo?e pom¨®c rozwi?za? problem agregacji PLT w warunkach in-vitro.

Jakie s? decyduj?ce czynniki w przypadku agregacji PLT in-vitro?

Podczas agregacji PLT przechodz? przez trzy etapy: nieaktywowane PLT/ aktywowane PLT/ zagregowane PLT. Aktywacja PLT to najwa?niejszy etap podczas agregacji PLT^[1]

Problem agregacji PLT mo?na zatem rozwi?za? poprzez zablokowanie procesu aktywacji PLT. W celu zrozumienia mechanizmu aktywacji PLT przeprowadzili?my dalsze badania struktury subkom¨®rkowej i wewn?trzkom¨®rkowej ?cie?ki transdukcji sygna?u, kt¨®re wykaza?y trzy g?¨®wne ?cie?ki regulacyjne podczas aktywacji PLT: ?cie?ka jon¨®w wapnia, ?cie?ka kinaz tyrozynowych oraz ?cie?ka glikoprotein GPIIb/IIIa^[2]

?

Ponadto przeprowadzono odpowiednie badania antagonist¨®w receptor¨®w w celu zablokowania ?cie?ki regulacyjnej, a w konsekwencji doprowadzenia do dezagregacji PLT. Wypr¨®bowano kilka r¨®?nych rodzaj¨®w antagonist¨®w receptor¨®w, kt¨®re uzyska?y dobre wyniki w blokowaniu agregacji PLT.

Fibrynogen i inne czynniki

Bez antagonisty receptora (2 PLT zlepiaj? si?)

Blokada receptora

Z antagonist? receptora (agregacja jest uniemo?liwiona)

?

Jak pokazano poni?ej, dodanie antagonist¨®w do pr¨®bek wra?liwych na antagonisty receptor¨®w przed agregacj? mo?e skutecznie jej zapobiec. Dodanie antagonist¨®w po agregacji mo?e r¨®wnie? doprowadzi? do dezagregacji PLT.

Po przetestowaniu r¨®?nych rodzaj¨®w pr¨®bek okaza?o si?, ?e cz??? pr¨®bek nie jest wra?liwa na dzia?anie antagonist¨®w. Dzieje si? tak dlatego, ?e te antagoni?ci skupiaj? si? tylko na jednej ?cie?ce regulacyjnej i maj? ograniczony wp?yw na pozosta?e dwie ?cie?ki.

?

Dalsze badania przeprowadzono, korzystaj?c z metody biologii molekularnej, aby zbada? mechanizm molekularny i cechy r¨®?nych grup rodnik¨®w. Ostatecznie spo?r¨®d tysi?cy substancji wytypowano szereg optymalnych zwi?zk¨®w chemicznych zawieraj?cych okre?lone grupy rodnik¨®w, kt¨®re s? wysoce skuteczne w blokowaniu trzech ?cie?ek regulacyjnych.

W celu dalszego udowodnienia wp?ywu antagonist¨®w na dezagregacj? PLT przeprowadzono eksperyment por¨®wnawczy pomi?dzy grup? kontroln? a grup?, w kt¨®rej antagoni?ci byli zablokowani. Wyniki eksperymentu s? przedstawione poni?ej:

Z eksperymentu wynika, ?e antagoni?ci zawieraj?cy okre?lone grupy rodnik¨®w maj? oczywisty wp?yw na dezagregacj? p?ytek krwi.

?

Ponadto wyr¨®?niono tak?e 3 kluczowe czynniki (odpowiednie pH, temperatura, mieszanie mechaniczne), kt¨®re wspomagaj? dezagregacj? PLT. Efekt nak?adania si? tych czynnik¨®w w procesie dezagregacji jest oczywisty. Dzi?ki po??czeniu wielu czynnik¨®w zagregowane p?ytki zostaj? zdezagregowane i mo?na uzyska? wiarygodn? warto?? p?ytek.

?

Funkcja dezagregacji PLT zosta?a u?yta w analizatorach BC-6800/ BC-6200/ BC-6800Plus/ CAL 6000/ CAL 8000 w trybie RET.Kliknij?tutaj, aby dowiedzie? si? wi?cej o tych produktach.

Bibliografia:

[1] The Platelet Membrane Glycoprotein IIb/III§Ñ Complex, David R. Phillips, etc., Annals of the New York Academy of Science(509), 177-187

[2] Ilya Reviakine. New horizons in platelet research: Understanding and harnessing platelet functional diversity[J]. Clinical Hemorheology and Microcirculation,2015,60:133-152